選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件，先測(cè)定濃度為cx的未知樣品吸光度為Ax，再向未知樣品中加入一定量的標(biāo)樣，配置成濃度為cx+Δc1、cx+Δc2……一系列樣品，分別顯色后再測(cè)定吸光度為A1、A2……在坐標(biāo)紙上繪圖，以吸光度A為縱坐標(biāo)，以濃度c為橫坐標(biāo)，分別畫出Δc1、Δc2所對(duì)應(yīng)的A1、A2等各點(diǎn)，連成直線后延長(zhǎng)，與橫軸的交點(diǎn)cx也就是未知樣品的濃度cs。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)加入法時(shí)要注意，加入的標(biāo)樣濃度要適當(dāng)，使畫出的曲線保持適當(dāng)角度，濃度過(guò)大或過(guò)小都會(huì)帶來(lái)測(cè)量誤差。
這種方法操作比較麻煩，不適于作系列樣品分析，但它適用于組成比較復(fù)雜，干擾因素較多>又不太清楚的樣品，因?yàn)樗芟尘暗挠绊憽?/div>
2.3 紫外可見分光光度計(jì)使用中的注意點(diǎn)
2.3.1 保護(hù)光源
光源燈有一定的壽命，儀器不工作時(shí)不要開燈，若工作間歇時(shí)間短，可不關(guān)燈。
一旦停>，則要待燈冷卻后再重新啟動(dòng)，并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時(shí)，就及時(shí)更換。
經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無(wú)水乙醇去除。
2.3.2 保證合適的工作環(huán)境
溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；
造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等；
甚至使儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。
實(shí)驗(yàn)室，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)具備四季恒溫的儀器室，配備恒溫設(shè)備。
環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電耦合器的可靠性，也是造成光學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。
因此定期清潔，保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
2.3.3 定期除塵、調(diào)校
2.3.4 正確使用比色皿
拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
清洗比色皿時(shí)，先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液（1:2）浸泡片刻，再用水沖洗。每次做完實(shí)驗(yàn)應(yīng)立即洗凈比色皿。
比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。
測(cè)定有色溶液吸光度時(shí)，一定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。在測(cè)定一系列溶液的吸光度時(shí)，通常都按由稀到濃的順序測(cè)定，以減少測(cè)量誤差。
若分光光度計(jì)噪音比較大，有可能是光源燈泡使用時(shí)間超過(guò)壽命期，可更換光源燈泡。
若自檢時(shí)提示波長(zhǎng)自檢出錯(cuò)，有可能是自檢過(guò)程中打開過(guò)儀器樣品室的蓋子，
