島津4in1代謝組學(xué)高效分析方案，為雜交水稻的高水平研究提速增效！

提供來源:上海百賀日期：2023年07月10日

導(dǎo)讀

　　代謝組學(xué)分析，尤其是非靶向代謝組學(xué)樣品分析對儀器、方法有的要求：色譜分離、質(zhì)譜檢測需要盡可能覆蓋未知化合物，組學(xué)樣品又存在樣品珍貴、總分析時間長、樣品基質(zhì)復(fù)雜、對質(zhì)譜負荷較重等問題；因此如何在的分析時間內(nèi)，消耗的樣品，覆蓋盡可能多的未知物，對質(zhì)譜端產(chǎn)生小的污染負荷并維持數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，是非靶向代謝組學(xué)分析一直面臨的挑戰(zhàn)。

島津4in1技術(shù)方案：全譜二維+高分辨質(zhì)譜或三重四極桿質(zhì)譜

　　島津4in1技術(shù)方案，通過全譜二維寬極性分離+LCMS-9050的正負極同時掃描功能，相比常規(guī)液質(zhì)分析方法，可以節(jié)省3/4的樣品和總分析時間，減少質(zhì)譜3/4的分析負擔(dān)，并通過平行設(shè)計實現(xiàn)充分平衡和清洗，減少了交叉污染和記憶效應(yīng)，提高了系統(tǒng)穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。利用4in1技術(shù)方案，島津與雜交水稻全國實驗室檢驗檢測合作開展不同口感黑米非靶向代謝組學(xué)研究，結(jié)果優(yōu)異，一起來看看吧！

　　代謝組學(xué)包含非靶向和靶向代謝組學(xué)，前者對不同組別樣品中的未知目標物或全組分進行分析，后者針對已知目標物進行分析檢測，兩者目的均是通過對比不同組別樣品中的成分差異，通過統(tǒng)計分析得到具體差異代謝物，從而指導(dǎo)、分析、解讀組別差異的因果、機理并展開差異物的實際篩查應(yīng)用。目前的通用分析配置是：液相色譜作為前端分離系統(tǒng)，高分辨質(zhì)譜或三重四極桿質(zhì)譜作為檢測器（前者用于非靶向，后者用于靶向）。

非靶向代謝組學(xué)分析的三大難點

　　代謝組學(xué)分析對色、質(zhì)譜的分離檢測能力、軟件數(shù)據(jù)里處理和統(tǒng)計分析功能、應(yīng)用人員方法設(shè)置等均有較高的門檻和要求，而非靶向代謝組學(xué)還有以下幾個特殊需求，增加了分析難度：

　　01對液相色譜的分析要求：

　　因非靶向代謝組學(xué)面對的是完全未知的目標物，范圍、化合物數(shù)量、分離條件等均無法預(yù)設(shè)，因此無法使用單一色譜柱，如反相色譜柱或親水色譜柱做分離；

　　02對質(zhì)譜端的分析要求：

　　同樣因為目標物完全未知，無法判斷目標物的電離能力，因此正離子和負離子都要掃描檢測；

　　03樣品特殊性：

　　樣品通常較珍貴，如動物組織樣品、細胞樣品、血液樣品等，因此要求樣品消耗量/進樣量盡可能少；樣品數(shù)量多，通常有2-5組樣品，每組樣品數(shù)大于6個，因此總分析時間長，如果樣品分析循環(huán)次數(shù)增加，則總分析時間更為成倍增加；樣品基質(zhì)復(fù)雜，對質(zhì)譜污染負擔(dān)較大。樣品特殊性在非靶向和靶向樣品都存在。

　　基于以上原因，如何在短的分析時間內(nèi)，消耗少的樣品，覆蓋盡可能多的未知物，對質(zhì)譜端產(chǎn)生小的污染負荷并維持數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，是非靶向代謝組學(xué)分析一直面臨的挑戰(zhàn)。

島津4in1代謝組學(xué)技術(shù)方案

　　兩大硬件部分

　　為了解決以上非靶向代謝組學(xué)三方面的難點，島津推出了4in1代謝組學(xué)技術(shù)方案。該方案硬件組成分為兩部分：

　　前端系統(tǒng)為全譜二維液相系統(tǒng)。該系統(tǒng)基于兩個授權(quán)發(fā)明：極性分流技術(shù)、在線稀釋技術(shù)，是島津產(chǎn)品，適合于未知物和全組分分析，可作為寬極性多目標物數(shù)據(jù)庫的通用分離平臺，并適用于相差較大的兩類關(guān)聯(lián)物質(zhì)的同時分析，而且該系統(tǒng)內(nèi)含一個UHPLC子系統(tǒng)，方便日常常規(guī)檢測；而且該系統(tǒng)具有平行設(shè)計，可實現(xiàn)1D和2D的充分平衡和清洗，減少了交叉污染和記憶效應(yīng)，提高了系統(tǒng)穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

全譜二維液相系統(tǒng)

　　質(zhì)譜端為LCMS-9050高分辨質(zhì)譜（非靶向）或三重四極桿系列產(chǎn)品（靶向）。LCMS-9050是島津推出的新一代高分辨QTOF。這一款高分辨四極桿-飛行時間液質(zhì)聯(lián)用儀傳承了島津LCMS-9030的設(shè)計，依然保持準確度高，穩(wěn)定性好，靈敏度高、高分辨率的性能。相對于其他品牌Q-TOF，其優(yōu)勢是極性切換時間大大縮短，大采集速度提升至200Hz，可在同一時段進行正負離子同時掃描，完成普通Q-TOF需要兩次進樣才能完成的工作。

　　方案優(yōu)勢

　　基于以上兩個技術(shù)，組合成為島津4in1技術(shù)方案。對于普通色譜系統(tǒng)，為了覆蓋高低極性化合物，需要分別用HILIC和RPLC進行分離；為了完成未知物正負離子掃描，需要各進一針完成正離子和負離子分析，而島津4in1方案=全譜二維+LCMS-9050，具有以下兩方面優(yōu)勢：

　　（1）通過寬極性分離+正負極同時掃描，實現(xiàn)4in1分析模式，從而節(jié)省3/4的樣品和總分析時間，并減少質(zhì)譜3/4的分析負擔(dān)；

　?。?）通過平行設(shè)計實現(xiàn)1D和2D的充分平衡和清洗，減少了交叉污染和記憶效應(yīng)，提高了系統(tǒng)穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

島津4in1一針分析=普通系統(tǒng)4針分析

案例分享-不同口感黑米非靶向代謝組學(xué)研究

　　雜交水稻全國實驗室檢驗檢測中心

　　雜交水稻全國實驗室是國家首批批復(fù)建設(shè)的20家實驗室之一，其檢驗檢測的分子檢測與品質(zhì)安全兩項工作在雜交水稻科技創(chuàng)新中起到了關(guān)鍵支撐作用，為雜交水稻的高質(zhì)量發(fā)展保駕護航。島津與雜交水稻全國實驗室檢驗檢測合作，利用4in1技術(shù)方案，嘗試不同個口感黑米非靶向代謝組學(xué)研究，取得優(yōu)異成果，并由此促成成立了“雜交水稻全國實驗室檢驗檢測心-島津合作實驗室”。

島津企業(yè)管理(中國)有限公司分析計測事業(yè)部營業(yè)部副部長朱精華（左）與雜交水稻全國實驗室執(zhí)行主任孫傳清（右）為合作實驗室揭牌

　　利用4in1方案分析雜交水稻全國實驗室檢驗檢測提供的30個不同口感黑米，并混合制作了一個QC樣品。為了評估、校準系統(tǒng)穩(wěn)定性，在批處理過程中加入10針QC樣品分析，進樣序號分別是1-4號，20號，36-40號，時間跨度26小時。將正負離子同事采集的10個QC樣品的TIC圖做疊加展示，可見數(shù)據(jù)重現(xiàn)性非常優(yōu)越；另外，在樣品中添加兩個內(nèi)標，一個為性正離子響應(yīng)，一個為低極性負離子響應(yīng)，并提取計算10個QC樣品中這兩個內(nèi)標的質(zhì)量穩(wěn)定性，結(jié)果兩個內(nèi)標質(zhì)量偏差均小于0.85ppm，結(jié)果理想，符合4in1分析的預(yù)期。

　　基于穩(wěn)定的色、質(zhì)譜表現(xiàn)，通過統(tǒng)計分析得到了優(yōu)異的代謝組學(xué)分析結(jié)果：正離子模式共檢測到代謝特征峰11780個，負離子模式共檢測到代謝特征峰13637個；統(tǒng)計分析顯示組內(nèi)相對聚集，組間區(qū)分明顯，滿足后續(xù)代謝組學(xué)分析要求；通過分組PLS-DA分析及置換驗證模型驗證，兩兩對比（好口感黑米vs差口感黑米）得到1473個差異代謝物，并通過數(shù)據(jù)庫鑒定了其中767個差異物，包含了脂肪?；?、黃酮類、氨基酸、萜類、芳香族、苯類等物質(zhì)。