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            【THUNDER小課堂】自噬與老年病

            提供來源:上海百賀 日期:2023年03月07日

            秀麗隱桿線蟲中自噬過程的高對比度成像

            通過使用Small Volume Computational Clearing(SVCC)的THUNDER Imager Model Organism機型對模型生物秀麗隱桿線蟲(一種線蟲)進行高對比度成像,可幫助更深入地理解自噬與老年病之間的關(guān)聯(lián)。自噬是一個自然的過程,細胞通過這個過程來自我毀滅,以產(chǎn)生能量并維持細胞活性。感染或癌癥等疾病引發(fā)的應(yīng)激通常會觸發(fā)以病原體或癌細胞為目標的自噬。自噬與年齡相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病之間的關(guān)系尚不清楚,對這種關(guān)系的深入理解可能有助于維持長期健康。使用高對比度THUNDER成像進行的秀麗隱桿線蟲自噬機制研究可能有助于將其推向臨床應(yīng)用,從而實現(xiàn)這一目標。

             

            引言

            自噬是一種受調(diào)節(jié)的自我吞噬過程,其能幫助細胞維持穩(wěn)態(tài)并重新獲得能量[1,2]。在基礎(chǔ)狀態(tài)下,自噬可用于長壽命蛋白的降解等,但它主要是在應(yīng)激反應(yīng)中被誘發(fā)。在感染這樣的應(yīng)激狀態(tài)下,其會靶向病原體,以進行溶酶體降解。在癌細胞引發(fā)的代謝應(yīng)激中,自噬為細胞活性提供ATP,保持細胞活力。癌細胞會誘導(dǎo)自噬,使細胞吃掉自己,從而保護其免于細胞死亡。自噬的特征是形成自噬體,并涉及多個步驟:開始、成核、延伸、成熟和降解。雖然自噬與健康有關(guān),但自噬與老年?。ㄈ缟窠?jīng)退行性疾?。┲g的關(guān)系仍不清楚[2]。如果能更好地理解這種關(guān)系,就可能會開發(fā)出能促進長期健康的臨床應(yīng)用。

             

            線蟲秀麗隱桿線蟲是一種經(jīng)過充分研究的模型生物,使得我們可以在整體生物中研究自噬和年齡相關(guān)的病理機制[3,4]。

            本文介紹如何使用THUNDER Imager對自噬和老年病進行詳細的研究。

            挑戰(zhàn)

            對秀麗隱桿線蟲成像時,快速獲得銳利的高對比度3D成像,清晰展示重要細節(jié)的解決方案很實用。常規(guī)的寬場顯微成像速度快,檢測靈敏度高,但是對厚標本的成像,如整個生物體,通常會出現(xiàn)離焦信號模糊導(dǎo)致的對比度降低[5]。

            方法

            本研究中使用表達MAH215 [6]、GFP和mCherry的秀麗隱桿線蟲。MAH215是一種雙色熒光mCherry:GFP:LGG-1蛋白,其可對自噬體和自噬溶酶體進行可視化,以監(jiān)測自噬流。GFP(綠色)表示自噬體,而mCherry(紅色)表示自噬溶酶體,后者可在酸性環(huán)境中淬滅GFP,從而導(dǎo)致發(fā)射mCherry信號。使用THUNDER Imager Model Organism對線蟲進行成像,應(yīng)用Small volume computational clearing(SVCC)處理圖像[5],然后生成很大強度投影。

            結(jié)果

            與傳統(tǒng)的寬場顯微鏡相比,THUNDER Imager Model Organism能夠清除非焦面信號,對秀麗隱桿線蟲進行清晰的立體與宏觀成像[5]。這樣,就可以更加詳細地研究細胞過程并對其定量。

            圖片

            圖1:秀麗隱桿線蟲的宏觀擴展景深圖像:原始寬場數(shù)據(jù)(左)和應(yīng)用SVCC后的THUNDER數(shù)據(jù)(右)。MAH215:自噬流,GFP(綠色):自噬體,mCherry(紅色):自噬溶酶體。

            圖片來源:Aditi U. Gurkar博士,美國匹茲堡大學(xué)醫(yī)學(xué)系。

            結(jié) 論

            與傳統(tǒng)的寬場成像相比,THUNDER的Small volume computational clearing(SVCC)技術(shù)[5]在對秀麗隱桿線蟲成像時會顯著增強對比度,從而解析高度細節(jié)化和更加清晰的立體圖像。THUNDER技術(shù)具備的zhuo越成像功能有助于對自噬和老年病之間的關(guān)系進行更深入的理解

            相關(guān)產(chǎn)品

             

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            THUNDER Imager Model Organism

             

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